Резюме

Терешков П.П., Максименя М. В., Фефелова Е.В.

Влияние факторов преаналитического этапа на качественный

И КОЛИЧЕСТВЕННый СОСТАВ микровезикул крови

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего образования «Читинская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения Российской Федерации

Цель исследования состояла в изучении влияния курения, физической нагрузки, условий забора крови и хранения проб, вида коагулянта на количественный и качественный состав микровезикул крови, определяемых методом проточной цитометрии.

Материалы и методы. Забирали кровь у 16 здоровых человек в возрасте от 19 до 35 лет, в пробирки с разными антикоагулянтами (калий-2-ЭДТА, гепарином, цитратом натрия), используя иглу 21 калибра без применения жгута. Микровезикулы выделяли путем трехкратного центрифугирования либо сразу, либо через 2 часа после стояния на столе, либо через 2 часа после непрерывного плавного перемешивания крови при комнатной температуре. У 8 человек оценивали количественный состав микровезикул до и после курения, у 8 человек – до и после интенсивной физической нагрузки. Микрочастицы окрашивали четырехцветной комбинацией моноклональных антител: CD42a-FITC, CD45 – PE, CD14- PС5 и CD235а – PС7. Анализ окрашенных везикул проводили на проточном цитофлуориметре Cytomics FC500 (Beckman Coulter, США), оборудованном лазерами 488 нм и 635 нм. Данные анализировались с использованием программного обеспечения Kaluza 1.5 (Beckman Coulter, Brea, Калифорния, США). Описательная статистика представлена средним значением (M) и стандартным отклонением (SD); для сравнения групп использовали критерий Манна-Уитни.

Результаты. Общее количество микровезикул у одного и того же человека во второй пробирке независимо от типа коагулянта выше, чем в третьей пробирке. Максимальное количество микрочастиц обнаружено в пробирках с ЭДТА. Гепарин снижал уровень тромбоцитарных и лейкоцитарных микровезикул. Наиболее стабильными при хранении являются образцы крови, забранной с цитратом натрия. Курение и физические нагрузки приводят к увеличению микровезикул в плазме крови, взятой на цитрате натрия.

Заключение. Для получения сопоставимых данных важным является стандартизация преаналитического этапа, так как целый ряд факторов существенно влияет на характеристики микровезикул, в частности, на их количество.

Ключевые слова: микровезикулы крови, преаналитический этап анализа.

Tereshkov P.P., Maksimenya M.V., Fefelova E.V.

THE FACTORS OF PREANALYTICAL STAGE INFLUENCE ON QUALITATIVE

AND QUANTITATIVE MICROVESICLES BLOOD COMPOSITION

Chita State Medical Academy, Chita, Russia

The purpose of the research was to study the effect of smoking, physical activity, conditions of blood sampling and storage of samples, coagulant on the quantitative and qualitative composition of microvesicles blood, that was determined by a method of flow cytometry

Materials and methods. We took blood from 10 healthy persons aged from 19 to 35 years in tubes with different anticoagulants (potassium-2-EDTA, heparin, sodium citrate) using a 21-gauge needle without the use of harness. Microvesicles were isolated by three-time centrifugation either immediately or 2 hours after standing on the table, or 2 hours after a continuous smooth stirring of blood at room temperature. Four people were evaluated on the quantitative composition of microvesicles before and after Smoking, and six people before and after intense physical exercise. Microparticles were stained with four-color combination of monoclonal antibody: CD42a-FITC, CD45 – PE, CD14 - PC5 and CD235а – RS7. Analysis of stained vesicles was performed on the flow cytometer Cytomics FC500 (Beckman Coulter, USA) equipped with lasers 488 nm and 635 nm. Data were analyzed by using Kaluza software 1.5 (Beckman Coulter, Brea, CA, USA). Statistics presented by the mean value (M) and standard deviation (SD); for the comparisons between groups was used the Mann-Whitney test.

Results. The total number of microvesicles of one and the same person in the second tube is higher than in the third test tube. The maximum number of microparticles was detected in the tubes with EDTA. Heparin decreased the level of platelet and leukocyte microvesicles. Blood samples, taken with sodium citrate are the most stable samples during storage. Smoking and physical activity lead to an increase of microvesicles in blood plasma, taken on sodium citrate.

Conclusion. Standardization of the preanalytical phase is important for obtaining comparable data, as a number of preanalytical factors significantly affect the characteristics of the microvesicles, in particular their number.

Key words: blood microvesicles, preanalytical stage of analysis.